目的观察小檗碱对食管癌细胞生长影响，探讨其作用机制。

方法于37℃，5%CO2培养箱常规培养食管癌细胞株EC-和ECa-，设对照组、小檗碱组（12.5、25、50、、mg/L），MTT法检测小檗碱对细胞生长的抑制作用；Trizol法抽提总RNA，基因表达谱芯片检测细胞基因表达，RT-qPCR检测部分差异基因及包含内含子的β-tubulin和Actin表达片段。

结果小檗碱可抑制管癌细胞株EC-和ECa-生长，IC50值分别为12.33、49.63mg/L；小檗碱干预后得到差异基因个，下调基因数占差异基因比率为78.84%。这些基因主要参与剪切子、癌通路、核糖体等信号通路。与对照组比较，小檗碱组SF3B3、SNRPD1、NCBP1mRNA表达降低（P0.01），包含内含子的β-tubulin和ActinmRNA表达片段增加（P0.01）。

结论小檗碱可抑制食管癌细胞生长，干预多个肿瘤相关基因表达，可通过干预剪切体相关基因影响RNA成熟。

小檗碱为中药黄连主要有效成分，对多种肿瘤细胞生长具一定抑制作用。在本研究中，为了探究小檗碱对食管癌生长的影响，以国内报道常应用的食管癌鳞癌细胞株Ec和Eca作为研究对象，这两个细胞为中国人所建立，Ec来源于高分化鳞癌，Eca为低分化鳞癌，比较能够代表中国人常见食管癌病理类型。结果发现，小檗碱对这两个细胞株生长都有很好的抑制作用，且具有剂量依赖性，其中对Ec作用更强，说明作为低分化鳞癌细胞株的Eca细胞对药物敏感性更低，在其他研究也有类似现象。

研究发现，小檗碱可抑制食管癌细胞株多个生物过程和细胞功能的基因表达，比如抑制细胞周期相关基因多达97个，说明它可以通过干预细胞周期抑制食管癌细胞增殖；已有研究表明是小檗碱可以使前列腺癌、鼻咽癌、乳腺癌等周期阻滞。小檗碱还可抑制组蛋白修饰、DNA复制相关基因，说明它可以干预食管癌细胞DNA复制和转录，从而抑制它生长。氨酸转运、糖和脂肪代谢相关基因，提示小檗碱可以干预食管癌细胞能量代谢。在临床中，小檗碱可用于糖尿病的治疗，说明有影响物质能量代谢的可能，已有研究也发现，小檗碱可干预某些肿瘤细胞的物质能量代谢。小檗碱抑制癌症相关通路基因多达50个，其中NFKB1、E2F2、E2F3、STAT5B、FOXO1等是和肿瘤生长密切相关的转录因子，而PDGFA，BMP2为生长因子，IGF1R、TGFBR1、FGFR3、CSF2RA为生长因子受体，AKT2、AKT1，SOS1、MAPK9为通路蛋白激酶，由此说明小檗碱对细胞作用于多个靶点。另外，小檗碱对嘧啶代谢、细胞周期、Hedgehog信号通路等相关基因都有抑制作用。

小檗碱可干预细胞剪切体相关基因多达21条。剪切体主要是由小分子的核RNA和蛋白质组成，前体信使RNA由多个内含子和外显子间隔形成，必须通过剪接体的作用去除内含子、连接外显子之后才能转变为成熟的信使RNA，从而翻译成蛋白发挥生理效应，RNA前切的异常与肿瘤发生、发展相关，并成为肿瘤治疗的靶点。由此说明小檗碱可干预细胞信使RNA成熟，这也可以解释差异基因中小檗碱可抑制基因表达比率高达78.84%的原因，因为表达谱基因芯片探针为针对基因转录的外显子，抑制了剪切就抑制成熟RNA数量。

为了验证小檗碱对剪切体干预作用，本研究应用定量PCR对剪切体3个基因SF3B3、SNRPD1、NCBP1进行了检测，发现小檗碱可以明显降低它们的表达，此与芯片结果一致，有研究发现SF3B3高表达和乳腺癌预后密切相关。由于剪切功能失常后导致非成熟RNA增多，为了进一步说明小檗碱干预了剪切体，本研究还对看家基因β-tubulin和Actin非成熟RNA进行了检测，以β-tubulin第2个内含子序列正向，第4个外显子序列为反向引物；Actin第3个外显子序列为正向，第4个内含子序列为反向为引物进行定量RT-PCR。结果发现，小檗碱可以导致非成熟β-tubulin和ActinRNA增多，提示小檗碱的确能够干预细胞剪切体的功能。

本文图表如下：

点击阅读原文下载全文